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生理生化檢測 - 苯丙氨酸解氨酶(PAL)代測檢測服務

苯丙氨酸解氨酶(PAL)代測檢測服務

1.測定原理

苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase，PAL)催化苯丙氨酸的脫氨反應，使NH3釋放出來形成反式肉桂酸。此酶的在植物體內次生物質(如木質素等)代謝中起重要作用。根據其產物，反式肉桂酸在290nm處吸光度的變化可以測定該酶的活性。

2.儀器設備

（1）紫外分光光度計（2）高速冷凍離心機

（3）研缽（4）移液管：0.5mL1支，1mL3支，2mL1支，5mL1支

（5）試管:10mL5支（6）恒溫水浴

3.試劑

（1）0.1mol·L-1硼酸緩沖液，pH8.8。

（2）0.02mol·L-1L-苯丙氨酸（用pH8.8硼酸緩沖液配制）。

（3）提取介質：內含0.05mol·L-1硼酸緩沖液、5.0mmol·L-1巰基乙醇、1.0mmol·L-1EDTA-Na2、5%甘油pH8.3；5%PVP（聚乙烯吡咯烷酮）。

（4）6mol·L-1HCl。

4.材料

正常生長或經誘導處理的水稻、小麥葉片（或黃化幼苗）、馬鈴薯塊莖等植物新鮮組織。

5.方法步驟

（1）PAL的提取：取待測植物樣品1-2g，-15冷凍固定后于研缽中加少量的提取介質、少量石英砂，冰浴研磨勻漿，最后用提取介質定容到10mL，攪拌均勻，4層紗布過濾，濾液在4下10000r/min離心15min，上清液即為待測酶液，4保存備用。

（2）PAL酶活性測定：取4支10mL試管（3支測定管，1支對照管），分別加入0.02mol·L-1L-苯丙氨酸1.0mL（對照管不加，代之為蒸餾水），硼酸緩沖液(pH8.8)2.0mL,酶液1.0mL（根據酶活性適當稀釋或增加體積），總體積4.0mL。搖勻后置30恒溫水浴保溫60min，加0.2mL6mol·L-1HCl終止反應，若有沉淀需過濾或離心。用對照管調零，在290nm處檢測測定管反應液的吸光度A290.

（3）以測定管反應液每小時A290增加0.01為一個酶活性單位（U）：

式中，Vt：酶液總體積（mL）；FW：樣品鮮重（g）；Vs：測定時取酶液的量（mL）;v：反應液總體積（mL）；t：反應時間（h）

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