|
| 細菌總蛋白提取試劑盒 |
 品牌：原鑫生物
貨號：YX-HU-74185
規(guī)格：48T/96T
|
 立即購買 |
|
細菌總蛋白提取試劑盒 
細菌總蛋白提取試劑盒操作步驟： 1.首先取0.5mL 10X細胞裂解緩沖液，用去離子水稀釋至5mL 1X細胞裂解緩沖液。 2.以5000 xg離心10分鐘，收集表達目的蛋白的細菌。重新移動培養(yǎng)基然后用1X PBS清洗顆粒。每100毫升細菌在4毫升1X細胞裂解緩沖液中重新懸浮細菌顆粒培養(yǎng)（OD600=1）。 3.添加40微升PMSF和80微升溶菌酶，將細菌懸浮液在37°C下培養(yǎng)30分鐘。 4.在搖動平臺上培養(yǎng)混合物10分鐘。 5.添加20微升DNA酶/核糖核酸酶，繼續(xù)在37°C下?lián)u動培養(yǎng)10分鐘。 6.通過在4°C下以3000 xg離心30分鐘的方式去除不溶性碎屑。收集超級游泳液（細胞裂解）緩沖液）在新鮮管中。 7.取10μl 2X SDS凝膠負載緩沖液和10μl細胞裂解緩沖液，混合煮沸，分析20μl，測定提取物含量通過10%SDS-PAGE進行電泳。并將含有目標蛋白質(zhì)的部分儲存在-70°C或直接加載到凈化柱上。
細菌總蛋白提取試劑盒注意事項：
1.可以添加蛋白酶抑制劑，但在使用Ni2時不要添加EDTA或其他螯合劑+螯合劑破壞了柱結(jié)合組氨酸標簽的能力。 2.可能需要將上清液通過一個0.45μm的過濾器，以防止在試驗過程中樹脂堵塞凈化后。 3.細菌細胞也可以通過超聲波（3倍10秒）裂解某些蛋白質(zhì)，但是，在超聲波作用下，細胞會保持低溫超聲波治療。 4.建議在提取后盡快使用提取的蛋白質(zhì)。 5.溶解在異丙醇中的PMSF應(yīng)在-20°C下儲存。
細菌總蛋白提取試劑盒：http://www.www.dancinlife.cn/products-375.html
|
400-788-2680
