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| 哺乳動物總蛋白elisa提取試劑盒 |
 品牌：原鑫生物
貨號：YX-BL-18291
規格：48T/96T
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哺乳動物總蛋白elisa提取試劑盒 
概述 該產品用于使用專有的裂解緩沖液從培養的哺乳動物細胞或組織提取總蛋白 特點 提取蛋白質為總蛋白，整個操作過程簡單省時，可用于提取培養的哺乳動物細胞或組織，可同時處理多個樣品，無需超離心。 應用 該試劑的組成簡單且與許多不同的應用相兼容，例如報告監測分析（例如熒光素酶，β-半乳糖苷酶，氯霉素乙酰轉移酶），蛋白質分析（例如PKA，PKC，酪氨酸激酶），免疫分析（例如Western印跡， ELISA，RIA）和蛋白質純化 組份 5X Buffer , 5X NaCl , 5X SDS , 5X DOC , 5X NP-40, 20X PBS , Protease inhibitor cocktail
哺乳動物總蛋白elisa提取試劑盒產品組成： 
試劑盒可以在常溫保存，除了 Protease inhibitor cocktail 需要在-20°C 保存，保質期 24 個月。
哺乳動物總蛋白elisa提取試劑盒提取步驟如下： 1.準備：根據 5X Buffer，5X NaCl，5X SDS，5X DOC 和 5X NP-40 為 1:1:1:1:1（v / v）配制細胞裂解緩沖液，1 ml 細
胞裂解緩沖液用于 106~107 個細胞或 5~20 mg 組織的蛋白提取。使用前加入 10 μl Protease inhibitor cocktail。 2. 洗滌細胞或組織，用細胞裂解緩沖液處理:
a.對于貼壁細胞：除去需提取細胞中的生長培養基，用 PBS 緩沖液沖洗細胞兩次，加入細胞裂解緩沖液（106~107 個
cells/ml），然后將整個細胞完全浸入冰袋中，在搖床上孵育 30 分鐘，階段性將細胞在細胞裂解緩沖液中重懸幾次，最
后刮掉并收集裂解液。
b.對于懸浮細胞：在 700 xg 下離心 5 分鐘，棄掉上清。用 PBS 重懸洗滌細胞兩次，在 4°C 離心并去除上清液。將沉淀重
懸于細胞裂解緩沖液中（106~107 個 cells/ml），浸入冰袋，在搖床上孵育 30 分鐘。
c.對于組織：將組織切成小塊，用 PBS 沖洗組織兩次。加入細胞裂解緩沖液（5~20 mg 組織/ml），將樣品（含細胞裂解
緩沖液）轉移到預冷微量勻漿器中，并在冰上均勻化組織 30~50 次。注意均質過程對靶蛋白的功能完整性至關重要。 3. 4°C 下，12,000 xg 離心裂解的細胞 10 min 來沉淀細胞碎片或者高速離心來制備蛋白質溶液，100,000 xg 離心 45 分鐘。 4. 將含蛋白質的上清液移至冷凍管中。在冰上保存可立即使用或將蛋白質溶液保存在-70°C。
1.在特殊情況下，當需要濃縮裂解物時，可以使用較低體積的裂解緩沖液裂解細胞。對于貼壁細胞，板尺寸將決定覆蓋
板表面緩沖液的量。對于懸浮液中的細胞，體積可以減少到細胞的 2X 體積。 2.如果細胞裂解緩沖液中含有所有三種洗滌劑，一些抗原可能被變性，一些蛋白質復合物可能被破壞。在這種情況下，
必須仔細選擇合適的洗滌劑。如果要省略一種或兩種洗滌劑溶液，則使用等體積的蒸餾水來代替洗滌劑溶液。 3. 蛋白酶抑制劑混合物適合在細胞裂解緩沖液中以 1:100 的稀釋度使用。 4. 在制備細胞裂解緩沖液后，在 2~8°C 下進行所有步驟。
5. 操作需佩戴防護眼鏡和手套，并注意安全。因為 PMSF 對健康有害，毒性非常大，并且對眼睛和皮膚有刺激性。本產
品僅供實驗室研究使用。
哺乳動物總蛋白elisa提取試劑盒：http://www.www.dancinlife.cn/products-376.html
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400-788-2680
